CD146基因重组质粒的构建及其在骨髓癌NCI-H929的表达

作者：陈勇; 贾长青; 梁峰; 王浩然

来源：解剖科学进展, 2016, 22(05): 501-503.

DOI：10.16695/j.cnki.1006-2947.2016.05.009

• CD146
• 融合蛋白
• 骨髓癌NCI-H929细胞

目的构建CD146真核表达载体,证实融合蛋白在骨髓瘤细胞内的表达、定位。方法提取人工具细胞Hela细胞的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增CD146全长编码基因,克隆至pCDNA3.1-3×Flag表达载体中。质粒转入骨髓癌NCI-H929细胞中,分别利用western blot和激光共焦扫描显微技术检测了重组质粒的表达以及在骨髓癌细胞中的定位。结果 CD146全长基因序列克隆真核表达载体中,酶切鉴定片段为1930bp。CD146在真核细胞中表达为113KD的糖蛋白,利用Western blot检测到真核转染的Flag-CD146表达,条带约为120KD,免疫荧光显示蛋白在细胞膜上有明显定位。结论成功构建了CD146真核表达载体,并验证了其表达定位。

• 单位
  沈阳医学院附属中心医院; 中国医科大学附属盛京医院