与CRY1相互作用的转录因子蛋白的筛选

作者：何志敏; 冯盼盼; 荣朵艳; 赵小英; 刘选明

来源：生物学杂志, 2016, 33(05): 47-86.

• CRY1
• 酵母双杂交
• 转录因子
• 拟南芥

拟南芥CRY1(cryptochrome1)通过蛋白相互作用启动蓝光信号的传导,从而促进植物光形态建成。为深入研究CRY1介导蓝光信号传导的机制,以CRY1为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统的营养缺陷型试验、液体显色试验、分段相互作用试验方法,从拟南芥转录因子酵母库中筛选与其相互作用的转录因子蛋白。结果表明,通过营养缺陷型筛选试验以及以ONPG为底物的液体显色试验初步获得与CRY1相互作用的41个转录因子蛋白;选取与CRY1相互作用蓝光依赖程度较高或酶活性高的转录因子以CPRG为底物的液体显色试验进行进一步验证,发现选取的转录因子蛋白与CRY1的相互作用具有蓝光依赖性且随蓝光处理时间的延长相互作用强度增强;CRY1各分段与转录因子蛋白相互作用试验结果表明转录因子SPL3和IDD4主要与CRY1的N端相互作用,与C端的相互作用比较微弱,但是SPL3与CRY1 C端的相互作用具有蓝光特异性而IDD4与CRY1 C端的蓝光特异性相互作用不明显。

• 单位
  化学生物传感与计量学国家重点实验室; 湖南大学