4种中国常见致病性基因种钩端螺旋体标准菌株的建立与评价

作者：邱海燕; 张翠彩^*

来源：疾病监测, 2023, 38(12): 1478-1483.

• 钩端螺旋体
• 基因种
• 多位点序列分型
• 标准菌株

目的 依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022)，建立Leptospira interrogans、L.borgpetersenii、L. alexanderi和L. weilii 4种中国常见致病性基因种钩端螺旋体标准菌株。方法 以56601、56604、56615、566554株致病性代表菌株为研究对象，利用暗视野显微镜开展形态学观察。以16S rRNA基因为靶基因进行聚合酶链式反应扩增、测序确定所属基因种。通过多位点序列分型(MLST)方法，对4株代表株进行分子分型分析，确定每株菌株7个位点等位基因号和序列型别(ST)。综合暗视野显微镜形态学观察、16S rRNA基因测序和MLST分型结果系统评价4株代表菌株经不同传代次数后的分子遗传学稳定性。同时通过Illumina NovaSeq测序平台对56604、56615和56655开展全基因组测序分析，了解菌株基因组特征。结果 暗视野显微镜下，4株代表菌株均具有典型的钩端螺旋体形态。16S rRNA基因序列分析显示，56601、56604、56615和56655分别隶属于L. interrogans、L. borgpetersenii、L. alexanderi和L. weilii 4种不同致病性基因种。MLST分型结果显示4株代表株隶属于4种不同ST型。4株代表株在亲代株及在体外连续传代一定代次后，暗视野显微镜下形态不变，所属基因种和MLST基因型结果一致，证明该4株代表株具有良好的分子遗传学稳定性。基因组测序分析显示，4株代表株基因组大小为3.93～4.69 Mb之间，G+C含量为36.00%～40.87%。结论 初步建立并评价了4种中国常见致病性基因种钩端螺旋体标准菌株，为钩端螺旋体病的疾病控制、临床诊断、教学科研、疫苗研发提供菌株资源。

• 单位
  中国疾病预防控制中心传染病预防控制所