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摘要
目的 研究石菖蒲挥发油调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜干细胞增殖及迁移的影响。方法 体外培养人牙周膜干细胞，分为对照组(不做干预)，LPS组(8μg·mL-1 LPS)，实验组[在8μg·mL-1 LPS的基础上加入50、100、150 mg·L-1 浓度的石菖蒲挥发油，干预24 h，细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞活力并筛选确定150 mg·L-1 石菖蒲挥发油为最适浓度]。再将细胞分为对照组(不做干预)，LPS组(8μg·mL-1 LPS)，实验组(8μg·mL-1 LPS+150 mg·L-1 石菖蒲挥发油)，LPS+抑制剂组(8μg·mL-1 LPS+10μmol·L-1 PI3K/AKT通路抑制剂LY294002)，石菖蒲挥发油+LPS+抑制剂组(8μg·mL-1 LPS+150 mg·L-1 石菖蒲挥发油+10μmol·L-1 PI3K/AKT通路抑制剂LY294002)，石菖蒲挥发油+LPS+激动剂组(8μg·mL-1 LPS+150 mg·L-1 石菖蒲挥发油+10μmol·L-1 PI3K/AKT通路激动剂SC79)，干预24 h。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1 β(IL-1 β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平；采用CCK-8法测定人牙周膜干细胞的细胞活力；采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖实验测定人牙周膜干细胞的增殖率；采用细胞划痕实验测定牙周膜干细胞的迁移率；采用蛋白免疫印迹法(WB)检测人牙周膜干细胞周期素D1(Cyclin D1)及PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平。结果 与对照组比较，LPS组细胞炎症因子IL-6、IL-1 β和TNF-α表达水平显著升高，细胞活力显著降低(P <0.05)，与LPS组比较，实验组加入不同浓度的石菖蒲挥发油后细胞活力提升，石菖蒲挥发油浓度为150 mg·L-1 时细胞活力显著提高并且炎症因子显著降低(P <0.05)，所以确定150 mg·L-1 石菖蒲挥发油是最佳浓度，进行进一步的实验。与对照组比较，LPS组细胞增殖率和Cyclin D1蛋白表达水平显著降低，p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白表达水平显著升高(P <0.05)；与LPS组比较，实验组和LPS+抑制剂组显著扭转了LPS诱导后人牙周膜干细胞中上述指标的变化(P <0.05)；与实验组比较，石菖蒲挥发油+LPS+抑制剂组加入PI3K/AKT通路抑制剂后，细胞增殖率和Cyclin D1蛋白表达水平进一步显著升高，p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白表达水平显著降低(P <0.05)，石菖蒲挥发油+LPS+激动剂组的这些指标变化与石菖蒲挥发油+LPS+抑制剂组趋势相反(P <0.05)。结论 石菖蒲挥发油可以提高LPS诱导的牙周膜干细胞的增殖、迁移并抑制其炎症，通过上调Cyclin D1蛋白提高牙周膜干细胞的增殖，其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路的信号转导相关。
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单位河北省沧州中西医结合医院; 沧州市中心医院
