胞内劳森菌实时荧光RPA方法的建立及初步应用

作者：刘立兵; 韩荞忆; 李睿文; 王金凤; 郝雪飘; 韩庆安; 王建昌^*; 袁万哲^*

来源：中国兽医科学, 2020, 50(09): 1106-1111.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0136

• 胞内劳森菌
• 16S rRNA基因
• 实时荧光RPA
• 等温扩增

本研究基于胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis)16S rRNA基因保守序列,设计特异性引物和exo探针,建立了一种能够快速检测胞内劳森菌的实时荧光重组酶聚合酶扩增方法(real-time RPA)。进一步对real-time RPA方法的特异性和灵敏性进行了分析,对临床疑似病例的猪粪便和回肠样品进行了检测,并同real-time LAMP和real-time PCR检测结果进行了比较。结果表明,该方法能够在39℃等温条件下,20 min内实现对胞内劳森菌的有效检测;所建立的方法特异性强,仅对L.intracellularis产生特异性扩增,对其他常见引起猪腹泻的病原均无扩增;灵敏性高,以L.intracellularis基因组DNA为模板,检出限为1.4×102fg/μL;在60份临床样品中,该方法对L.intracellularis的检出率为66.7%(40/60),同real-time LAMP和real-time PCR方法一致。本研究所建立的real-time RPA方法反应快速、特异性强、灵敏性高,可用于猪场胞内劳森菌的快速检测。

• 单位
  河北农业大学