基于大肠埃希菌O157∶H7的荧光定量冻干检测试剂盒的研制

作者：粟元; 朱龙佼; 曹继娟; 刘建龙; 许文涛^*

来源：生物技术通报, 2022, 38(03): 264-275.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-0768

• E. coli O157∶H7
• 核酸
• 荧光定量PCR
• 冻干保护剂
• 试剂盒

大肠埃希菌O157∶H7(Escherichia coli O157∶H7，E.coli O157∶H7)作为一种食源性致病菌，其分布广泛、危害性大。为了研制一种基于E.coli O157∶H7的既能实现快速、简单和灵敏检测，又能够实现常温储存及运输的试剂盒，本研究利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，qPCR)技术，结合真空冷冻干燥技术，研制了保留核酸检测性能、易于常温储存及运输、减少气溶胶污染的E.coli O157∶H7荧光定量冻干检测试剂盒。研制的试剂盒采用冻干技术保留了核酸扩增试剂的检测性能，复水后，在Taq DNA聚合酶的作用下通过循环扩增实时监测荧光信号的积累，实现荧光定量检测，所提出的方法在40 min内可检测到2.1 copies/μL的eaeA基因。该技术为E.coli O157∶H7的检测提供良好的研究基础和技术参考，填补了市场灵敏度高、便于储存的E.coli O157∶H7检测试剂盒的缺乏。

• 单位
  中国农业大学; 大连民族大学