重组鸡细胞外脂肪酸结合蛋白的原核表达及鉴定

作者：田志雄; 李娜娜; 卢晓晓; 郭敏; 张宁; 李欣; 张鼎; 赵宇军; 闫芳; 高荣琨; 宁官保^*; 田文霞^*

来源：山西农业科学, 2020, 48(06): 855-888.

• 细胞外脂肪酸结合蛋白
• 基因克隆
• 原核表达
• 蛋白纯化

细胞外脂肪酸结合蛋白(Extracellular Fatty Acid-Binding Protein,Ex-FABP)是一种鸡胚发育过程中表达于肥大软骨、肌肉纤维和血粒细胞中的脂蛋白,大小约为21 ku。试验通过构建Ex-FABP原核表达载体,以实现Ex-FABP蛋白的大量表达,并对其进行纯化及鉴定;以艾维茵肉鸡胫骨软骨总RNA为模板,RT-PCR扩增ExFABP基因,连接pGEM-T克隆载体后,再与载体pET-28a连接并转化,获得含pET-28a-Ex-FABP重组表达质粒的Escherichia coli BL21(DE3)表达菌株;使用IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE鉴定表达情况,利用镍柱亲和层析法纯化蛋白,对纯化蛋白进行Western Blot鉴定。结果表明,试验成功构建重组表达载体pET-28a-Ex-FABP;表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,结果显示,目的蛋白在24 ku附近出现特异性条带,表明表达蛋白正确。试验成功表达了大量纯度比较高的Ex-FABP蛋白,可为后续的动物试验以及家禽疾病的研究提供理论依据。

• 单位
  动物科技学院; 山西农业大学