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摘要
目的：研究并探索雌二醇偶联碱性磷酸酶的制备工艺，解决原有混合酸酐法制备工艺对人体与环境的毒性、产物不稳定和检测值的相关性偏离问题。方法：采用混合酸酐法及碳二亚胺试剂偶联雌二醇与碱性磷酸酶，在碳二亚胺法中添加N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），对比混合酸酐法与碳二亚胺法灵敏度、稳定性及相关性。结果：对比加入NHS后增强反应活性的能力，碳二亚胺法制备的酶结合物稳定性更好、灵敏度高、相关性更好。结论：雌二醇的衍生物采用雌二醇碳3位衍生物（Estradiol3-CME），碳二亚胺试剂（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐）（EDC）偶联，再加入微量的NHS作为催化剂，碱性磷酸酶与雌二醇衍生物的反应摩尔比为1∶10，此条件下可以得到活性较好，稳定性较强的酶结合物。
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单位上海科华生物工程股份有限公司
