荧光PCR探针熔解曲线技术检测痰标本结核分枝杆菌利福平耐药性的研究

作者：王嫩寒; 田丽丽; 陈双双; 赵琰枫; 樊瑞芳; 陈昊; 任怡宣; 张洁; 易俊莉; 杨新宇; 于兰; 丁北川; 李传友^*; 代小伟^*

来源：中国防痨杂志, 2023, 45(06): 583-588.

DOI：10.19982/j.issn.1000-6621.20230086

• 分枝杆菌,结核
• 聚合酶链反应
• 抗药性
• 敏感性与特异性

目的:评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescent polymerase chain reaction probe melting curve, MeltPro)技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌耐药性的临床应用价值。方法:收集2021年5月至2022年5月北京市疾病预防控制中心结核病门诊收治的GeneXpert MTB/RIF检测阳性的初治肺结核患者的痰标本，对每份标本同时进行涂片镜检、分枝杆菌分离培养、MeltPro技术利福平耐药性检测。分析痰标本荷菌量对MeltPro技术耐药性检测结果的影响；培养阳性菌株行利福平比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”),比较比例法药敏试验、GeneXpert MTB/RIF和MeltPro技术检测利福平耐药率的差异；并以培养阳性菌株利福平比例法药敏试验结果为参考标准，评价MeltPro技术耐药性检测的效能。结果:研究共收集结核分枝杆菌阳性合格痰标本158份(例),经分枝杆菌分离培养获得阳性菌株130株。MeltPro技术检测痰标本结核分枝杆菌利福平耐药的成功率为79.1%(125/158),且随着痰涂片结果等级的升高，检测成功率由“阴性”的59.3%(32/54)上升至“+++”标本的100.0%(18/18);同时，随着GeneXpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌等级的升高，检测成功率也由“极低”的64.5%(20/31)上升至“高”的92.9%(26/28),各等级间差异均有统计学意义(H=22.271,P=0.001;H=15.637,P=0.001)。MeltPro技术的利福平耐药检出率为17.6%(22/125),GeneXpert MTB/RIF方法的利福平耐药检出率为12.7%(20/158),比例法药敏试验的利福平耐药检出率为13.1%(17/130),三者比较差异无统计学意义(χ2=1.537,P=0.464)。以培养阳性菌株比例法药敏试验结果为参考标准，MeltPro技术和GeneXpert MTB/RIF方法检测利福平耐药的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别为100.0%(17/17)、94.6%(88/93)、77.3%(17/22)、100.0%(88/88)、0.845和100.0%(17/17)、97.3%(110/113)、85.0%(17/20)、100.0%(110/110)、0.906。结论:MeltPro技术检测肺结核患者痰标本结核分枝杆菌利福平耐药性的敏感度和特异度均较高，可快速准确筛查患者利福平耐药情况，但在基层实验室推广应用时需注意痰标本的质量。

• 单位
  北京市疾病预防控制中心