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摘要
为了研究一种高效的预防猪圆环病毒2b亚型(PCV2b)感染的亚单位疫苗,针对其主要免疫原Cap蛋白的基因进行分析,将Cap蛋白上重要中和表位226LKDPPLNP233以重复串联的方式连接于cap基因C端(capE2),并构建于pFastBacTMI载体上,借助昆虫杆状病毒表达系统进行表达,利用SDS-PAGE、Western blot分析和动态光散射及透射电镜观察等对重组蛋白CapE2进行鉴定。将纯化的CapE2蛋白免疫小鼠,同时以未连接中和表位的Cap蛋白、PCV2亚单位疫苗和PBS为对照,收集免疫血清分析目的重组蛋白的免疫原性以及连接中和表位对Cap蛋白免疫原性的影响。结果表明,Cap及CapE2蛋白成功在sf21细胞内表达;纯化后的目的蛋白能够有效地与PCV2单克隆抗体产生特异性反应,并且可以在体外自组装形成均一的、直径约17 nm的病毒样颗粒;血清抗体检测结果显示,在第2次免疫后,CapE2免疫组抗体水平迅速提高,并在3免之后显著高于其他免疫组;中和抗体测定结果表明,Cap及CapE2组血清抗体效价均显著高于疫苗免疫对照组,且CapE2免疫组血清的中和效价可达1:29。通过昆虫杆状病毒表达系统表达的连接2个中和表位的Cap蛋白,能自组装形成病毒样颗粒,并且具有较好的免疫原性,为PCV2感染的预防提供了新的疫苗候选。
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