Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表达及其免疫血清的制备

作者：张勇侠; 高雅丽; 康庄; 丛聪; 罗心梅; 代云见; 陈宗香; 李立; 李桂华; 刘兰军^*

来源：微生物学免疫学进展, 2018, 46(05): 7-13.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2018.05.002

• 登革病毒
• NS1蛋白
• 原核表达
• 免疫荧光

目的原核表达、纯化II型登革病毒NS1A蛋白(NS1蛋白1～180氨基酸即DENV2 NS1A),将其免疫动物制备免疫血清并鉴定。方法构建重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG低温诱导表达。表达的融合蛋白经Hitrap Talon crude柱亲和层析纯化后,免疫雌性日本长耳兔获得抗DENV2 NS1A兔抗血清,用Western blot和免疫荧光检测免疫血清对重组麻疹病毒MVS191-DENV2 NS1 6Xhis的识别和结合特性。结果重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组融合蛋白相对分子质量为100 000,纯化后蛋白纯度在85%以上,免疫获得的抗DENV2 NS1A兔抗血清可识别重组病毒MVS191-DENV2 NS1 6XHis表达的DENV2 NS1蛋白。结论原核表达并纯化了DENV2 NS1A蛋白,建立了基于NS1蛋白的重组病毒MVS191-DENV2 NS1 6XHis的Western blot和免疫荧光检测方法,为登革热疫苗研制中重组病毒MVS191-DENV2 NS1 6XHis的质检奠定了基础。

• 单位
  成都生物制品研究所有限责任公司