本发明公开了一种重组人源融合胶原蛋白及其高效羟基化方法与应用。该重组人源融合胶原蛋白的基酸序列如SEQ ID No.1所示,其细胞活性比单一蛋白的高。通过将来源于炭疽芽孢杆菌的脯氨酸羟化与人源胶原基因构建双质粒共表达,先诱导表达来源于炭疽芽孢杆菌的脯氨酸羟化酶,待胞内羟化酶积一定量后,再诱导强启动子控制下的胶原蛋白快速表达,通过调控酶和胶原蛋白的表达时间点,实现大子量融合胶原的表达及同步高效羟基化,羟化率达到63%,羟化率更高的胶原蛋白其稳定性更好且生物性更高。