麻疹病毒载体中外源基因插入位置对基因表达及病毒复制的影响

作者：苏文浩; 任秀秀; 赵婷婷; 王轶男; 李实实; 黄秋芳; 王晓杰; 张晓焕; 卫江波^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2022, 42(12).

• 麻疹病毒沪191株
• 麻疹病毒载体
• 反向遗传学
• S1蛋白

目的研究麻疹病毒(measles virus, MV)沪191株载体中, 外源基因插入位置对基因表达及病毒复制的影响。方法将新型冠状病毒S1蛋白表达序列克隆至MV反基因组不同基因间隔区(N基因前、P和M基因之间、H和L基因之间), 与分别表达T7聚合酶及N、P、L蛋白的辅助质粒共转染293T细胞, 转染后细胞裂解上清感染Vero细胞, 以获得重组病毒。通过RT-PCR、免疫荧光法、Western blot和ELISA检测S1蛋白, 并对重组病毒的增殖特性进行检测。结果 S1克隆至MV N基因前转染未得到重组病毒, 克隆至P和M基因之间、H和L基因之间成功获得了重组病毒MV-M-S1、MV-L-S1, 并可检测到S1蛋白的表达。MV-M-S1的S1表达量高于MV-L-S1, 但病毒滴度低于MV-L-S1。结论将外源基因插入MV基因组中不同位置, 对基因表达及病毒复制将产生不同影响, 为后续MV载体的改造提供了经验和参考。