口腔鳞状细胞癌稳定过表达蛋白酶体激活因子PA28γ细胞株的构建

作者：辛川; 王冏珂; 李敬; 曾昕^*

来源：华西口腔医学杂志, 2020, 38(01): 6-10.

DOI：10.7518/hxkq.2020.01.002

• 口腔鳞状细胞癌
• PA28γ
• 慢病毒
• 过表达载体
• 过表达稳转株

目的构建蛋白酶体激活因子PA28γ过表达的口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞稳转株,并验证其过表达PA28γ的效率。方法首先采用聚合酶链反应(PCR)克隆PA28γ基因至pLOV.CMV.cherry.2A.EF1a.PuroR慢病毒载体中,采用PCR和DNA测序比对分析进行鉴定;其次采用293T细胞包装病毒;然后采用病毒感染OSCC细胞构建PA28γ稳定过表达细胞株。最后利用免疫印迹技术检测OSCC细胞稳转株中PA28γ表达的水平。结果 DNA测序结果显示成功构建PA28γ过表达慢病毒载体构建;荧光结果显示,PA28γ过表达慢病毒成功感染OSCC细胞,并呈现樱桃红色荧光;免疫印迹结果显示,构建的PA28γ稳定过表达细胞显著提高细胞中PA28γ表达水平。结论 PA28γ过表达慢病毒载体能显著提高细胞中PA28γ蛋白表达水平,为进一步研究PA28γ对OSCC发生发展的影响及其机制提供了稳定的细胞转染载体。

• 单位
  四川大学华西口腔医院; 口腔疾病研究国家重点实验室