双循环线性滚环扩增检测HBV替诺福韦耐药位点的方法学研究

作者：林钟劝; 陈瑶; 韩梅; 夏宇; 姚远; 和昱晨; 张波

来源：第三军医大学学报, 2013, (11): 1093-1096.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2013.11.016

• 双循环滚环扩增
• 耐药位点
• 突变 circular rolling circle amplification
• resistance mutations
• mutation

目的探讨双循环线性滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)检测HBV替诺福韦耐药基因突变位点的可行性。方法以HBV替诺福韦耐药基因突变位点为检测靶点,设计该位点的锁式探针以及包括该位点的HBV野生型、突变性模板。锁式探针与野生型模板特异识别并结合,通过E.coli连接酶连接为闭合环形结构,加入引物启动第1轮RCA;扩增产物用HpaⅠ酶切游离出检测模板,重复上述过程进行第2轮RCA,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物;并对该方法的特异性、检测限及连接效率的影响因素进行初步探讨。结果探针与模板的杂交温度为45℃时,探针的环化连接效率最高、特异性最好。通过对不同浓度野生型...

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学