miR-152通过HLA-G/KIR2DL4通路对dNK分泌LIF和GM-CSF的影响

作者：杨洋; 陈宥艺; 宋姗姗; 张欣文^*

来源：热带医学杂志, 2022, 22(05): 625-629.

• 微小RNA
• 蜕膜NK细胞
• 白血病抑制因子
• 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

目的 研究微小RNA-152(miR-152)通过其靶基因人类白细胞抗原G(HLA-G)与蜕膜NK细胞（dNK）表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）KIR2DL4之间通路，对dNK分泌白血病抑制因子（LIF）及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的影响。方法 收集2020年9月-2020年10月在西安市人民医院行人工流产患者的正常早孕蜕膜组织5例，分选、纯化dNK。在体外培养的HTR8细胞中过表达和抑制miR-152，分为对照组（未转染）、过表达组（转染miR-152 mimics）与抑制组（转染miR-152 inhibitor）。实时定量PCR(qRT-PCR)检测转染后miR-152水平。构建dNK与过表达或抑制miR-152后的HTR8共培养体系，并在共培养过程中特异性封闭dNK KIR2DL4，分组为：NC组[HTR-8+dNK+白细胞介素-15(IL-15)共培养]、A组（过表达miR-152的HTR-8+dNK+IL-15）、B组（抑制miR-152的HTR-8+dNK+IL-15）、C组[过表达miR-152的HTR-8+dNK+KIR2DL4抑制物（anti-KIR2DL4）+IL-15]、D组[过表达miR-152的HTR-8+dNK+IgG1(anti-KIR2DL4对照物)+IL-15]、E组（转染miR-152 mimics NC的HTR-8+dNK+antiKIR2DL4+IL-15）。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测共培养24 h后上清中LIF、GM-CSF的表达。结果 转染后6 h于荧光显微镜下观察转染效率（羧基荧光素酶标记对照），可见转染效率超过90%。与对照组（1.27±0.29）相比，过表达组细胞中miR-152表达水平升高（2.63±0.44），抑制组细胞中miR-152表达降低（0.34±0.12），差异均有统计学意义（F=130.47、130.47,P<0.05）。与NC组相比，C组共培养上清中LIF、GM-CSF的浓度最低；A、D、E组在过表达miR-152的前提条件下，共培养上清中LIF、GM-CSF的浓度均分别低于NC组；B组共培养上清中LIF、GM-CSF的浓度高于NC组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-152能够通过HLA-G/KIR2DL4通路影响dNK分泌LIF、GM-CSF。

• 单位
  西安医学院; 西安市第四医院