海南坡鹿HSF1cDNA的克隆与表达

作者：成鹰; 杜丽; 王凤阳; 刘涛; 李治深; 许世英; 符运南; 林贤梅; 吴科榜; 林杰材; 满初日嘎

来源：兽类学报, 2009, 29(02): 191-197.

DOI：10.16829/j.slxb.2009.02.013

• 海南坡鹿
• HSF1
• 克隆
• 表达

采用RT-PCR和RACE方法扩增海南坡鹿热休克转录调节因子1(Heat shock transcription factor1,HSF1)cDNA全长,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析;构建pET28a-hdHSF1表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,海南坡鹿HSF1cDNA全长为2036bp,含有1个1578bp的开放阅读框,编码525个氨基酸。经生物信息学分析,HSF1是一个等电点为4.93的亲水性蛋白。经IPTG诱导表达后,得到一个带组氨酸标签的约62kD的融合蛋白,用抗His单克隆抗体进行Western blot,得到一条约62kD特异性抗体结合带,表明海南坡鹿HSF1原核表达载体成功构建并表达。

• 单位
  海南大学