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摘要
以蜂王幼虫冻干粉为原料，通过混菌发酵制备蜂王幼虫抗氧化肽并对其抗氧化活性、结构进行研究。以发酵液的多肽得率和蛋白酶活力为评价指标，通过单因素和响应面试验确定最佳发酵工艺，采用超滤对酶解粗多肽进行分离，测定了粗多肽的氨基酸组成以及各组分的体外抗氧化活性，并通过LC-MS/MS鉴定了抗氧化活性最好的超滤组分氨基酸序列。结果表明，混菌发酵蜂王幼虫制备抗氧化肽的最佳工艺为：枯草芽孢杆菌与黑曲霉的复配比为2.4∶1,接种量6.5%,发酵时间57.5 h,该条件下多肽得率为15.49%,发酵体系中蛋白酶活力为133.55 U/mL。蜂王幼虫粗多肽的抗氧化氨基酸和疏水氨基酸含量分别为58.11%和47.2%。超滤分离得到5个组分F1～F5,其中分子质量<1 kDa的组分F1具有最优的抗氧化活性，其清除DPPH自由基和ABTS阳离子自由基的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)值分别为(1.06±0.01)、(0.165±0.004)mg/mL,铁还原力OD700=0.389。组分F1通过LC-MS/MS分离鉴定并与Mascot多肽数据库比对得到9个可能的肽段，其分子质量在600～1 100 Da。研究结果为蜂王幼虫的抗氧化肽产品开发提供实验依据。
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