禽脑脊髓炎病毒外壳蛋白VP1的原核表达及活性鉴定

作者：胡亚歌; 吴海洋; 翟庆贺; 牛晓赛; 董新荣; 卢尧; 杨灵芝; 郭建友; 朱杰^*

来源：中国家禽, 2022, 44(10): 38-43.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2022.10.007

• 禽脑脊髓炎病毒
• VP1
• 原核表达
• 活性分析

为研究禽脑脊髓炎病毒（Avian encephalomyelitis virus,AEV）外壳蛋白VP1的免疫原性，研究根据AEV-187株VP1基因序列，设计一对表达引物，利用RT-PCR扩增获得了828 bp片段，成功构建表达质粒pET-32a-VP1，将质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，获得工程菌株pET-32a-VP1-BL21(DE3)，经IPTG诱导后，采用SDS-PAGE、Western blot检测VP1蛋白的表达形式及反应活性；采用表达的VP1蛋白制备疫苗免疫SPF鸡，检测免疫后血清中AEV抗体水平。结果显示：VP1蛋白为部分可溶性表达，分子量为50 ku；与AEV阳性鸡血清能够发生反应；采用VP1蛋白制备的疫苗安全性良好，免疫SPF鸡后14 d即可检测到AEV抗体，免疫后21 d和28 d的抗体水平有大幅度增长，阳性率达到80%，证明表达的VP1蛋白具有免疫原性。综上所述，原核表达的VP1蛋白具有良好的抗原活性，为AEV亚单位疫苗的研制奠定了基础。