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摘要
目的检测不同血管紧张素II(Ang II)的浓度对大鼠心肌细胞内钙调磷酸酶(CaN)Aβ基因表达水平的影响。方法设计并合成大鼠CaN Aβ和β-肌动蛋白(β-actin)基因的特异性引物和TaqMan探针,将PCR扩增的CaN Aβ和β-actin基因片段分别克隆入pMD18-T载体,用于标准曲线的绘制和样品检测。用ROX标记的TaqMan探针对CaN Aβ基因的表达进行定量;用FAM标记的TaqMan探针对β-actin看家基因的表达进行定量。通过看家基因β-actin表达水平的定量结果对CaN Aβ表达水平的定量结果进行校正。改变培养的大鼠心肌细胞中Ang II的浓度并定量检测其CaN Aβ基因的表达水平。结果应用重组质粒绘制的定量曲线循环阈值与模板的浓度具有良好的线性关系;与定量对照曲线比较计算出正常大鼠心肌细胞内CaN Aβ是β-actin含量的90%。随着Ang II浓度的增高,大鼠心肌细胞内CaN mRNA的表达水平亦增加。结论成功地建立了利用TaqMan探针检测CaN Aβ和β-actin基因的多重荧光定量PCR方法并绘制标准曲线,从定量角度进一步证实Ang II能刺激CaN基因表达的水平。
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