乳酸片球菌R-4细菌素PA-1原核表达及其理化特性

作者：焦明; 罗玉霞; 陈亚男; 舒伦; 吉林台; 金山^*

来源：食品与生物技术学报, 2023, 42(11): 98-105.

• 乳酸片球菌R-4
• 细菌素PA-1
• pedA基因
• 原核表达
• 抑菌范围

为实现原核表达产出细菌素并检测其理化特性，作者将乳酸片球菌R-4细菌素pedA基因进行扩增回收，与pMD19-T载体连接后转入E.coli DH5α感受态细胞进行克隆。提取克隆后的pedA基因与表达载体pET-32a（+）连接，形成重组质粒pET-32a-pedA并转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞，经异丙基硫代半乳糖苷诱导，乳酸片球菌R-4细菌素PA-1在大肠杆菌细胞进行表达。表达蛋白质经Ni-NTA柱纯化后，以金黄色葡萄球菌为指示菌检测其理化特性。结果表明，在E.coli BL21(DE3)细胞中成功表达相对分子质量为26 000的乳酸片球菌R-4细菌素PA-1并完成纯化。纯化后的乳酸片球菌R-4细菌素PA-1在40～121℃作用20 min、在pH 2～12、紫外线照射0～10 h、过氧化氢酶作用2 h后，其抑菌范围分别为14.7～15.6 mm、14.0～16.5mm、15.1～15.8 mm和14.9 mm，而分别经胃蛋白酶和胰蛋白酶作用2 h均失去抑菌作用。这表明乳酸片球菌R-4细菌素PA-1对高温、强酸强碱、紫外线和过氧化氢酶均具有较好的稳定性，而胃蛋白酶和胰蛋白酶会使其失活。

• 单位
  动物科学学院; 内蒙古农业大学