超声微泡介导CTLA-4基因靶向抑制对T淋巴细胞免疫活性及肿瘤免疫杀伤率影响的实验研究

作者：韩志芬; 饶程义; 康佳; 陈玉^*

来源：中华肿瘤防治杂志, 2023, 30(01): 14-19.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2023.01.03

• 细胞毒性T细胞抗原-4
• 超声介导微泡破裂技术
• 基因沉默
• T淋巴细胞
• 肿瘤免疫

目的 利用超声介导微泡破裂技术(UTMD)介导T细胞转染，下调细胞毒性T细胞抗原-4(CTLA-4)基因表达，观察转染T细胞免疫活性变化，检测转染T细胞对MGC-803胃癌细胞的体外免疫杀伤率。方法 分离纯化C57小鼠脾脏T淋巴细胞，构建靶向CTLA-4基因的短发夹RNA表达质粒，超声微泡介导CTLA-4质粒转染，设置转染组、阴性对照组和空白组，流式细胞仪分析转染率，实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CTLA-4基因表达，蛋白质印迹法检测各分组CTLA-4蛋白表达，流式细胞仪检测各分组T淋巴细胞活性标志CD25表达情况。按照30∶1靶效比将转染T淋巴细胞与MGC-803胃癌细胞共培养72 h,观察各分组体外肿瘤细胞杀伤率。结果 超声微泡介导shRNA转染率达71.6%,转染组CTLA-4基因和蛋白表达降低。转染组、阴性对照组和空白组CTLA-4 mRNA的表达分别为0.994±0.091、3.571±0.342和3.924±0.422,差异有统计学意义，F=86.374,P<0.001。转染组、阴性对照组和空白组CTLA-4蛋白相对表达量分别为0.153±0.031、0.517±0.102和0.499±0.094,差异有统计学意义，F=20.394,P=0.002。转染48 h后，转染组T细胞活化标志CD25表达升高，转染组、阴性对照组和空白组CD25表达分别为(29.13±3.73)%、(9.01±1.24)%和(9.33±1.07)%,差异有统计学意义，F=72.034,P<0.001。转染72 h后，转染T淋巴细胞肿瘤杀伤率增强，MGC-803胃癌细胞杀伤率达到(49.6±5.73)%,而阴性对照组和空白组MGC-803胃癌细胞杀伤率分别为(23.2±1.91)%和(21.6±1.57)%,差异有统计学意义，F=57.138,P<0.001。结论 通过UTMD介导转染能有效沉默CTLA-4基因和蛋白表达，上调T细胞免疫活性，增强T细胞对MGC-803胃癌细胞体外免疫杀伤作用。

• 单位
  成都中医药大学附属医院