骨肉瘤细胞中Plk1的表达和定位

作者：沈涛; 巴根; 李妍; 郭然; 陈之光; 杨蕾; 郭洲洋; 付勤

来源：解剖科学进展, 2017, 23(02): 137-143.

DOI：10.16695/j.cnki.1006-2947.2017.02.008

• hPlk1
• 骨肉瘤细胞U2OS

目的构建真核表达载体GFP-hPlk1并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法以pcDNA3.1-hPlk1为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk1基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测。同时利用激光共聚焦扫描显微镜观察GFP-hPlk1在U2OS细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hPlk1蛋白。结果 hPlk1基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hPlk1融合蛋白表达,分子质量Mr约为93 000Da。GFP-hPlk1在骨肉瘤细胞U2OS中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hPlk1蛋白。结论成功地构建了GFP-hPlk1真核表达质粒,并在骨肉瘤细胞U2OS中表达。

• 单位
  中国医科大学附属盛京医院; 基础医学院; 中国医科大学