摘要
目的 探讨中性粒细胞来源外泌体对皮肤缺损愈合的影响。方法 (1)抽取10名健康志愿者的静脉血,分离纯化中性粒细胞,用差速离心法从中性粒细胞上清液中制备外泌体。(2)制备全层皮肤缺损的大鼠创伤模型,将其随机分为3组:对照组、50μg/mL外泌体组和100μg/mL外泌体组,用CCK8实验测定血管内皮细胞增殖情况,用划痕实验测定血管内皮细胞的迁移情况,探讨中性粒细胞来源外泌体对内皮细胞体外管状结构形成的影响;伤后7、14 d,观察皮肤创面愈合情况,比较不同处理组的创面愈合率;伤后14 d,对各组创面组织进行HE染色和Masson染色,观察胶原纤维的排列情况。结果 (1)中性粒细胞来源外泌体为直径约100 nm的圆形或椭圆形囊泡。(2)伤后12 h,通过划痕实验测得各组创面中血管内皮细胞愈合率相近(P>0.05)。随着时间延长,24 h时,100μg/mL中性粒细胞来源外泌体处理组愈合率高于对照组(P<0.01)和50μg/mL中性粒细胞来源外泌体处理组(P<0.05);伤后12 h,通过CCK8实验测得,50μg/mL和100μg/mL中性粒细胞来源外泌体处理组血管内皮细胞增殖数量高于对照组(P<0.01),24 h时这两组的结果仍高于对照组(P<0.01)。管腔形成实验结果表明,中性粒细胞来源外泌体能促进血管内皮细胞体外管状结构形成(P<0.01)。(3)伤后7、14 d,与对照组相比,50、100μg/mL外泌体组的创面愈合率均增高(P<0.01),且100μg/mL外泌体组的创面愈合率高于50μg/mL外泌体组(P<0.01)。伤后14 d,与对照组相比,100μg/mL外泌体组创面新形成的表皮和真皮更长,胶原纤维数量增多且排列方向高度一致。结论 中性粒细胞来源外泌体通过促进新生血管内皮细胞的增殖、迁移和胶原纤维形成,从而加速大鼠全层皮肤缺损愈合。
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