寻常型天疱疮抗原Dsg3基因的真核表达

作者：孙峥嵘; 耿龙; 吉耀华; 徐媛媛; 翟宁; 阮强; 陈洪铎

来源：中华皮肤科杂志, 2007, (09): 552-554.

• 天疱疮
• 重组抗原
• Dsg3 EC1-EC5

目的探讨寻常型天疱疮自身抗原Dsg3 EC1-EC5在哺乳动物细胞的克隆、表达及纯化,并以重组的Dsg抗原检测寻常型天疱疮患者及正常人血清中的天疱疮抗体。方法根据基因库中的Dsg3基因序列分析,采用RT-PCR法扩增自身抗原Dsg3 EC1-EC5多肽片段的cDNA,定向插入真核表达质粒pcDNA3.1TM/myc-His（-）B[1],稳定转染人宫颈癌细胞系表达重组融合蛋白,并经Ni+亲和层析柱纯化。采用蛋白质印迹法鉴定蛋白表达产物。以重组Dsg3 EC1-EC5蛋白为抗原用ELISA检测40份寻常型天疱疮患者及40份正常人对照组血清。结果成功构建真核表达重组体pcDNA3.1TM/myc-His（-）B-Dsg3。纯化的Dsg3 EC1-EC5蛋白质能够与寻常型天疱疮患者血清中的天疱疮抗体发生反应。ELISA方法检测寻常型天疱疮患者血清,结果显示,天疱疮抗体的阳性率为95%。结论真核表达的Dsg3 EC1-EC5蛋白与寻常型天疱疮患者血清中的抗体发生特异性反应。

• 单位
  中国医科大学; 中国医科大学附属第一医院