瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶基因的克隆与表达

作者：刘晓华; 李慧美; 柯颖笑; 张凯强; 李响敏; 李欣; 付金衡; 李海星

来源：食品科学, 2017, 38(06): 1-5.

• 共轭亚油酸
• 亚油酸异构酶
• 干酪乳杆菌
• 克隆
• 表达

以从黄牛瘤胃中分离到的一株具有将亚油酸转化为c9,t11-共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Fx为出发菌株,提取其基因组DNA,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增得到1 700 bp大小的亚油酸异构酶(linoleic acid isomerase,LAI)基因片段,将该基因片段纯化后进行TA克隆,得到重组质粒p UCm-T-LAI,将重组质粒p UCm-T-LAI和表达质粒p ET-Dsb A同时进行双酶切,连接得到重组表达载体p ET-Dsb A-LAI,经PCR鉴定和酶切后,将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21中,得到具有LAI活性的重组菌株,能将亚油酸转化为c9,t11-CLA,表明从Lactobacillus casei Fx成功克隆LAI,该研究将有助于深入了解不同瘤胃细菌特异性合成不同CLA异构体的LAI基因差异。

• 单位
  南昌大学; 食品科学与技术国家重点实验室; 中德联合研究院