利用慢病毒载体观察microRNA-194对人骨肉瘤细胞系U2-OS生物学特性的影响

作者：韩康; 赵廷宝; 卞娜; 蔡成魁; 颜世举; 王鑫; 肖春; 沙浩; 董川; 杨彤涛; 周勇; 马保安

来源：现代生物医学进展, 2014, 14(23): 4401-4405.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2014.23.001

• microRNA-194
• 慢病毒
• 骨肉瘤
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

目的:通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为探索microRNA-194作为骨肉瘤生物治疗的新靶点提供理论和实验依据。方法:PCR扩增pri-miR-194及miR-194-5成熟体,克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染大肠杆菌感受态细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS。进行MTT,流式,平板克隆等试验。结果:1.重组慢病毒表达质粒构建正确,过表达及抑制过表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml;2.microRNA-194过表达的人骨肉瘤细胞系U2-OS细胞增殖速度,凋亡率及细胞周期相较于其它实验组都有明显变化(P<0.01)。结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制过表达慢病毒表达载体;miR-194的表达水平对U2-OS细胞的增殖和凋亡造成显著影响。microRNA-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点,但该基因对骨肉瘤发生发展的作用及其机制尚待进一步研究。

• 单位
  中国人民解放军济南军区总医院; 第四军医大学; 唐都医院