集成干扰素突变体IIFN/165S的构建及其生物学评价

作者：田硕; 姚文兵; 徐晨

来源：中国生物工程杂志, 2013, (07): 8-12.

DOI：10.13523/j.cb.20130702

• 集成干扰素
• 定点突变
• 高效
• 抗肿瘤 Integrated interferon Site-directed mutagenesis High potency Anti-tumor

目的:通过定点突变,构建集成干扰素(IIFN/165S),以期获得高效的新型药物分子。方法:采用PCR体外定点突变技术,使集成干扰素IIFN基因的第165位密码子由CGT突变为AGT。扩增片段克隆入pET-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。在LB培养基中培养,经IPTG诱导表达的IIFN/165S经包涵体变性、复性以及层析纯化后,经SDS-PAGE、Western blot和MALDI-TOF-MS分析,用WISH-VSV系统进行抗病毒活性测定同时应用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:IIFN/165S以包涵体形式表达。纯化后,IIFN/165S的纯度大于95%,分子量为1...

• 单位
  中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院; 中国药科大学; 医学分子生物学国家重点实验室