NPM1 K263 SUMO化位点在PEDV N蛋白与NPM1共定位中的作用

作者：季朝阳; 石达; 陈建飞; 王潇博; 时洪艳; 张鑫; 冯力

来源：中国预防兽医学报, 2017, 39(11): 940-942.

• 猪流行性腹泻病毒
• 核衣壳蛋白
• 核仁蛋白NPM1
• 定点突变

为阐明细胞核仁蛋白NPM1与猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N蛋白)共定位的关键位点。本实验通过设计突变引物,利用重叠延伸PCR方法对NPM1氨基酸位点T199、K230和K263进行定点突变,分别将其克隆至真核表达载体pDsRed2-N1中,获得重组质粒pDsRed2-NPM1(T199A)、pDsRed2-NPM1(K230R)、pDsRed2-NPM1(K263R)。随后分别将pDsRed2-NPM1(WT)、pDsRed2-NPM1(T199A)、pDsRed2-NPM1(K230R)、pDsRed2-NPM1(K263R)与重组质粒pAcGFP-N共转染VeroE6细胞。共聚焦结果显示NPM1(T199A)、NPM1(K230R)、野生型NPM1均与N蛋白共定位于细胞的核仁中。虽然NPM1(K263R)与N蛋白具有共定位现象,但两者共定位于细胞核中。该实验结果为进一步研究核仁蛋白NPM1参与PEDV复制的分子机制奠定了基础。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所