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摘要
目的 建立可检测狐狸物种中犬库布病毒(CaKoV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。方法 利用PCR方法扩增狐狸CaKoV的3D基因504bp，将其克隆到pEASY-Blunt载体，构建重组质粒作为阳性质粒，以其为模板建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法，验证其灵敏度、特异性和重复性。结果 建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法检测目的基因在6.12×101～6.12×108拷贝/μl时呈良好的线性关系，相关系数为0.994，斜率为-4.369，灵敏度6.12×101拷贝/μl。该方法对于CPV、CDV和CCV未出现特异性扩增。所有标准曲线在溶解温度为86.49℃时出现单一的特异峰。使用本方法检测2021年辽宁、山东地区的253份狐狸临床标本，总阳性率为7.91%。结论 建立的CaKoV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法敏感、特异，用于狐狸CaKoV感染的快速检测。
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