β-乳球蛋白聚乙二醇定点修饰物的制备及其抗原性变化

作者：刘成梅; 江辛琳; 李冬梅; 周磊; 钟俊桢; 吉莉; 罗舜菁^*

来源：食品科学, 2021, 42(02): 1-7.

• β-乳球蛋白
• 聚乙二醇
• 共价修饰
• 定点修饰
• 抗原性

为探究不同共价修饰位点对β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG)抗原性影响,采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)定点修饰技术对β-LG第121位半胱氨酸(Cys121)游离巯基进行修饰。通过单因素试验优化,得到最佳修饰条件:β-LG与mPEG-MAL物质的量比1∶30,在0.1 mol/L,pH 7.0的磷酸钠缓冲液(含3倍物质的量的TCEP,25%乙醇及2 mmol/L EDTA)中4℃反应24 h。使用优化条件制备产物修饰率达64.1%,分离纯化后产物纯度达94%。游离巯基含量测定结果显示修饰后β-LG游离巯基含量由52.3 μmol/g降为0.3μmol/g。经验证mPEG-MAL与β-LG Cys121游离巯基发生特异性结合。经巯基定点修饰后,β-LG-MAL较天然β-LG抗原性显著提升25.9%,巯基修饰与前期不同位点修饰抗原性结果相反,定点修饰能有效探究不同位点共价修饰对蛋白抗原性的影响。

• 单位
  南昌大学食品科学与技术国家重点实验室; 江西丹霞生物科技股份有限公司