荧光素标记的反义寡核苷酸在大鼠肾小管上皮细胞中的时相分布

作者：***; 余学清; 周树录; 董秀清

来源：检验医学与临床, 2006, (09): 417-419.

• 荧光素
• 寡核苷酸
• 肾小管
• 上皮细胞

目的观察反义寡核苷酸(AS-ODN)在大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)中的时相分布;比较AS-ODN以脂质体(DOTAP)包裹或以游离形式转染细胞的区别。方法合成一条与大鼠骨调素(OPN)cDNA序列互补的AS-ODN,在5′端标记荧光素(FAM);将AS-ODN/DOTAP复合物(AS-ODN浓度3μmol/L)或游离AS-ODN(6μmol/L)处理培养的NRK52E细胞,于不同时间点取细胞于荧光显微镜下观察计数,同时进行普通光镜下细胞计数,计算转染效率。结果AS-ODN/DOTAP复合物在细胞中呈颗粒状分布,处理细胞3h后可见细胞胞浆中出现荧光颗粒,之后AS-ODN转移进入胞核,第8h时在胞核中可达很高浓度,并维持较长时间;游离AS-ODN在细胞中呈弥散状分布,处理细胞5h后可见细胞中出现荧光,第8h时在胞浆和胞核中可达较高浓度,并维持较长时间;AS-ODN/DOTAP复合物的转染效率明显高于游离AS-ODN;细胞是否贴壁生长及贴壁生长的细胞密度也影响AS-ODN的转染效率。结论AS-ODN转染进入细胞后最终浓聚在细胞核中,并维持较长时间;阳离子脂质体能提高AS-ODN转染速率和转染效率。

• 单位
  中山大学附属第一医院; 广东药学院; 广州市花都区人民医院