T7E1检测CRISPR-Cas9基因编辑效果实验设计

作者：王宏刚; 魏远; 李艳君; 朱玉山^*

来源：实验技术与管理, 2023, 40(05): 38-41.

DOI：10.16791/j.cnki.sjg.2023.05.006

• T7核酸内切酶1
• CRISPR-Cas9
• 实验教学
• 科研反哺教学

CRISPR-Cas9是一种现代生命科学研究中普遍使用的新型基因编辑技术。为了升级课程内容体系，使实验教学贴近科研实际，提升实验课程教学质量，设计了T7核酸内切酶1(T7E1)检测CRISPR-Cas9基因编辑效果实验。以CRISPR-Cas9基因编辑技术对mfn1编辑过的HeLa细胞为实验材料，提取基因组DNA,PCR扩增mfn1基因片段，切胶回收后，变性，退火，使用T7E1对编辑效果进行检测。经1%琼脂糖凝胶电泳，可观察到T7E1将略大于500 bp的mfn1基因片段切成两条大小约为250 bp的DNA片段，表明CRISPR-Cas9成功地对mfn1进行了编辑。