鸡树突状细胞的间接免疫荧光制片方法比较

作者：何静怡; 舒鼎铭; 林楚晓; 李莹; 王艳; 罗成龙^*

来源：广东农业科学, 2020, 47(10): 126-131.

DOI：10.16768/j.issn.1004-874X.2020.10.016

• 鸡
• 树突状细胞
• 免疫荧光
• 激光共聚焦扫描
• 细胞爬片法
• 细胞滴片法

【目的】比较分析骨髓源鸡树突状细胞两种间接免疫荧光制片方法(细胞爬片法和细胞滴片法),以进一步提高研究树突状细胞生物学的实验技术和方法。【方法】以鸡胚为试验素材,分离原代细胞,定向诱导分化获得未成熟的树突状细胞,并利用新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)lasota株激活细胞。监测内源性蛋白ROBO2(Roundabout)和外源性蛋白NDV表达情况,鸡源NDV抗体与小鼠源ROBO2单克隆抗体混合孵育,结合荧光素二抗进行标记。应用激光共聚焦扫描显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)对树突状细胞进行荧光成像并捕抓图像数据,多方位分析对比细胞爬片法和细胞滴片法。【结果】细胞滴片制作过程繁琐且耗时长;细胞爬片则操作简单可缩短实验时间。两种制片方法的NDV和ROBO2单阳性和阴性分别存在极显著差异,双阳性存在荧光反应性显著差异。【结论】滴片法蛋白免疫反应性更优,适合标记目的蛋白进行亚细胞定位。爬片法始终维持细胞形态学特征和保持蛋白特性,利于两抗体荧光重叠,综合显色性更强。

• 单位
  广东省农业科学院动物科学研究所