脓毒症小鼠肝细胞自噬与LC3及P62表达的实验研究

作者：沈美佳; 孙力超; 张国强^*

来源：中华急诊医学杂志, 2019, (04).

• 脓毒症
• 盲肠结扎穿孔法
• 肝损伤
• 自噬
• LC3
• P62
• 炎症因子
• 小鼠

目的 探究盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)建立的脓毒症小鼠模型肝细胞自噬的发生情况及不同时间点自噬相关蛋白的表达规律。方法 50只6～8周龄清洁级雄性ICR小鼠按照随机数字表法随机分为5组：CLP 3 h组,CLP 6 h组,CLP 12 h组,CLP 24 h组和对照组,于术后相应时间点取材。生化法检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)；ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的表达量；HE染色观察肝组织炎症情况；电镜观察肝组织自噬体和自噬溶酶体的超微结构；免疫印迹法检测肝组织自噬蛋白LC3(微管相关蛋白轻链3)和P62的表达量；免疫荧光观察自噬体的位置和数量。采用SPSS 21.0进行统计学分析,两组间比较采用两独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果 CLP术后ALT和AST明显升高,均在12 h到达高峰,分别为(137.8 ± 11.94)U/L和(475.3 ± 57.34)U/L；IL-6的表达量在6 h到达高峰(2589.63±27.96)pg/ml；TNF-α在3 h到达高峰(320.21±8.9)pg/ml；HE染色观察到肝库普弗细胞活化,单个粒细胞浸润；电镜观察到自噬体,自噬溶酶体形成；与对照组相比,免疫印迹法显示LC3Ⅱ/Ⅰ比值在先升高后降低,6 h达到高峰(t=13.35,P<0.05),P62蛋白含量先降低后升高,在6 h达到最低(t=66.11,P<0.05),与LC3Ⅱ/Ⅰ趋势正好相反；免疫荧光结果显示LC3荧光强度于6 h达到高峰(t=12.52,P=0.05)。结论 盲肠结扎穿孔法建立脓毒症小鼠模型肝脏发生了自噬现象,且自噬先增强后减弱,自噬体形成在6 h达高峰。

• 单位
  中日友好医院