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摘要
目的：研究芪术抗癌方对二乙基亚硝胺(DEN)联合四氯化碳(CCl4)诱导肝癌模型小鼠肝脏及人肝癌Huh7细胞中糖异生酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1)的调控作用，探讨其调节肝癌细胞代谢重编程并抑制细胞增殖的作用机制。方法：使用DEN联合CCl4腹腔注射构建肝癌小鼠模型，设置正常组、模型组、芪术抗癌方组，每天予以芪术抗癌方(3.51g·kg-1)或等体积生理盐水灌胃，干预8周后收集血清及肝脏样本。检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)和甲胎蛋白(AFP)评估各组小鼠肝功能变化；苏木素-伊红(HE)染色及天狼星红染色观察肝组织病理改变。细胞实验将Huh7细胞分为空白组、芪术抗癌方低、中、高剂量组和(或)PCK1抑制剂(盐酸SKF-34288)组、索拉非尼阳性药物组，给予对应含药血清和药物处理。采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8法)、集落形成实验、Edu荧光标记检测、细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量检测、细胞周期流式检测评估各组Huh7细胞增殖能力、能量代谢变化情况以及对Huh7细胞周期的影响。蛋白免疫印迹法(Western blot)用于检测PCK1、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)的蛋白表达水平。结果：与模型组相比，芪术抗癌方组小鼠肝癌组织中细胞异型、坏死、胶原纤维沉积等病理改变有所减轻，肝脏肿瘤数量(P＜0.01)减少，血清ALT、AST、γ-GT和AFP水平降低(P＜0.01)。细胞水平上，与空白组相比，芪术抗癌方含药血清低、中、高剂量组和索拉非尼组均可显著降低Huh7细胞存活率(P＜0.01)，减少Edu标记的阳性细胞数(P＜0.01)，抑制其克隆增殖能力(P＜0.01)；芪术抗癌方组还可降低细胞内ATP含量(P＜0.05)，增加细胞周期G0/G1期分布比例(P＜0.05)，且呈剂量依赖性。与模型组和细胞空白组相比，芪术抗癌方组小鼠肝癌组织及Huh7细胞的PCK1、p21蛋白水平显著降低(P＜0.05)，p-Akt蛋白水平明显增加(P＜0.05)，但Akt蛋白水平差异均无统计学意义。与空白组相比，盐酸SKF-34288组Huh7细胞ATP含量、细胞存活率显著升高(P＜0.05)，但Edu阳性细胞比率、G0/G1期分布比例变化无统计学差异(P＞0.05)；与盐酸SKF-34288组相比，芪术抗癌方联合盐酸SKF-34288组显著降低Huh7细胞的ATP含量、细胞存活率及Edu阳性细胞比率(P＜0.05)，显著增加G0/G1期分布比例(P＜0.05)。结论：芪术抗癌方可能通过激活PCK1诱导肝癌细胞代谢重编程促进Akt/p21介导的抑癌作用，从而发挥抗肝癌增殖的作用机制。
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