急性感染期内恒河猴外周血中人/猴嵌合免疫缺陷病毒包膜蛋白的N糖基化位点分析

作者：石银; 万延民; 陈健; 王婧; 任艳琴; 魏强; 从喆; 徐建青

来源：中华预防医学杂志, 2016, 50(10): 869-873.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2016.10.007

• 猴免疫缺陷病毒
• 感染
• 病毒包膜蛋白质类
• 糖基化

目的分析人/猴嵌合免疫缺陷病毒(SHIVSF162P3)包膜蛋白N糖基化位点的数量和分布及病毒传播能力。方法两只雌性成年(4周岁)中国恒河猴,编号Rh1和Rh2,体重分别为4和5kg。通过静脉攻毒的方式向Rh1和Rh2接种SHIVSF162P3,每只剂量为300半数组织培养感染剂量,在攻毒后第3、7、10、14、17、21、24、28、35、42、49、56、63、70和77天采集血液样本。对样本进行病毒RNA抽提和cDNA合成,采用实时荧光定量PCR测定病毒RNA水平。对攻毒后第7、14、28和77天的血浆样本进行单基因组扩增,使用Bio-edit中的Clustal W软件进行包膜蛋白全长多序列比对,用MEGA6.06软件计算配对差异距离,采用HIV Databases中的软件计算包膜蛋白N糖基化位点和可变区氨基酸数目,比较序列多样性、N糖基化位点数量的差异。结果从接种的病毒中共扩增得到55条包膜蛋白全长序列,其核苷酸序列平均配对差异距离为(0.166 6±0.096 3)%。病毒载量在攻毒后第10天达到峰值,lg转换值分别为7.68和7.49拷见/ml;在攻毒后第42天,病毒载量达到调定点,lg转换值分别为4.27和4.81拷贝/ml。攻毒后第7天,Rh1和Rh2血样中包含25个N糖基化位点的病毒包膜蛋白序列的比例分别达到83%(20/24)和94%(29/31),高于接种病毒中的比例[49%(27/55)]。随着感染时间的延长,Rh1和Rh2血浆中SHIVSF162P3病毒包膜序列的多样性逐渐增大,包含25个N糖基化位点的包膜蛋白序列比例逐渐降低,包含27个N糖基化位点病毒所占比例逐渐升高;在第28天Rh1体内包含27个N糖基化位点的序列比例达到29%(6/21),Rh2在第77天达到35%(13/37)。V1V5区糖基化位点分析发现,N糖基化位点数目的变化主要来自于V4区。与包含27个糖基化位点的包膜蛋白序列相比,包含25个糖基化位点的病毒包膜蛋白序列在V4区缺失7个氨基酸(TWNNTIG),导致V4区在392位和396位缺少2个N糖基化位点。结论 V4区低糖基化的SHIVSF162P3在传播过程中占优势地位;而随着感染时间的延长,V4区高糖基化的SHIVSF162P3逐渐在猴体内获得复制优势。

• 单位
  中国医学科学院医学实验动物研究所; 上海市公共卫生临床中心; 温州医科大学