PPFP基因转染人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1前后的蛋白质组学研究

作者：刘剑鸣; 王志明; 李萃; 段朝军; 邓姣; 李新营

来源：肿瘤, 2014, 34(09): 795-802.

• 甲状腺肿瘤
• 基因转移技术
• 蛋白质组学
• PPFP基因

目的 :采用蛋白质组学技术检测转染致瘤基因PPFP前后人正常甲状腺Nthy-ori 3-1细胞中蛋白质组分的改变,筛选PPFP基因调控的蛋白,以期为寻找甲状腺滤泡状癌(follicular thyroid carcinoma,FTC)的标志性蛋白或新的药物靶标蛋白提供线索。方法 :收集Nthy-ori 3-1、Nthy-ori 3-1vector和Nthy-ori 3-1PPFP细胞,提取细胞总蛋白,采用二维凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)制备3组细胞的总蛋白2-DE图谱;应用PDQuest软件对2-DE图谱进行比较分析,寻找差异表达的蛋白质点;采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption-ionization time-of-l ight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析技术对这些差异表达的蛋白质进行鉴定,并选取其中MALDI-TOF-MS鉴定分数较高、覆盖率较大且认为与FTC发生和发展关系较为密切的5种蛋白[prohibitin、半乳糖凝集素1(galectin-1)、细胞角蛋白8(cytokeratin 8)、cytokeratin 19和热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)]作为验证对象,采用蛋白质印迹法检测各蛋白在3组细胞中的表达水平。结果 :采用2-DE技术建立了Nthy-ori 3-1、Nthy-ori 3-1vector和Nthy-ori 3-1PPFP 3组细胞的2-DE图谱。应用PDQuest软件分析发现,Nthy-ori 3-1PPFP细胞与亲本Nthy-ori 3-1细胞及空载体Nthy-ori3-1vector细胞中差异在2倍以上的蛋白质斑点有38个,采用MALDI-TOF-MS质谱分析技术结合数据库搜索,共鉴定出了28个差异蛋白质点。Nthy-ori 3-1PPFP细胞与2个对照组相比,表达上调的点有19个,表达下调的点有9个。蛋白质印迹法检测结果与蛋白质组学研究结果完全一致。结论 :PPFP基因转染Nthy-ori 3-1细胞后共筛选获得28个差异表达的蛋白,这些差异表达的蛋白可能是PPFP基因调控的蛋白,为进一步阐明FTC发生和发展的分子机制奠定了基础。

• 单位
  湖南省人民医院; 中南大学湘雅医院