TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测PCV2、Hps和Mhp方法的建立和应用

作者：迟玉华; 金风英; 韩勇^*

来源：养殖与饲料, 2023, 22(06): 17-21.

DOI：10.13300/j.cnki.cn42-1648/s.2023.06.031

• 猪圆环病毒2型
• 副猪嗜血杆菌
• 猪肺炎支原体
• 荧光定量聚合酶链式反应
• 防控

[目的]建立一种同时鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)、副猪嗜血杆菌(Hps)、猪支原体肺炎(Mhp)的检测方法,为PCV2、Hps和Mhp的净化提供技术支撑。[方法]针对PCV2的ORF2基因、Hps的tbpA基因、Mhp的p36基因保守序列,设计3对引物和TaqMan-MGB探针。人工合成包含了荧光PCR扩增目的基因在内的序列,并与载体连接,构建重组质粒PCV2-ORF2、Hps-tbpA、Mhp-p36,测序正确后作为标准质粒。条件优化后建立PCV2、Hps和Mhp的TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法。[结果]该方法具有良好的特异性,与其他常见猪病原不发生交叉反应。PCV2、Hps和Mhp敏感性最低检出量分别达到1.33×10、1.77×10、1.86×10 copies/μL。[结论]TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测法具有良好的敏感性、特异性、重复性,而且快速、准确。