原代大鼠主动脉内皮细胞衰老模型的建立

作者：苗新宇; 朱潇潇; 龚燕平; 谷昭艳; 李春霖^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2019, 35(03): 230-235.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008757

• 衰老
• 大鼠主动脉内皮细胞(RAEC)
• 原代培养

目的建立血管衰老模型,观察比较高葡萄糖(HG)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、过氧化氢(H2O2)及棕榈酸(PA)对原代大鼠主动脉内皮细胞(RAEC)诱导衰老作用。方法取2月龄雄性Wistar大鼠,组织贴块法提取原代RAEC并采用免疫荧光细胞化学染色检测CD31的表达并进行鉴定。分别应用30 mmol/L葡萄糖(HG)、 10μmol/L AngⅡ、 100μmol/L H2O2、 0.5 mmol/L PA处理原代RAEC 24 h。采用β-半乳糖苷酶染色观察细胞衰老情况,实时荧光定量PCR检测衰老相关基因P16 mRNA的水平, Western blot法检测衰老相关基因P16、 P21、 P53蛋白水平;免疫荧光细胞化学染色观察P16的表达, CCK-8法观察细胞存活率。结果与对照组相比,各处理组RAEC中β-半乳糖苷酶染色细胞增加,以H2O2、 PA处理组更明显; HG、 AngⅡ、 H2O2、 PA处理均可增加RAEC的P16 mRNA水平; AngⅡ、 H2O2、 PA处理均可增强RAEC的P16、 P21蛋白水平,以H2O2组最显著。各处理组细胞P16表达均增强,与对照组相比, HG组与AngⅡ组细胞存活率变化不大, H2O2组与PA组细胞存活率显著降低。结论 HG、 AngⅡ、 H2O2及PA均可诱导建立RAEC衰老模型,以H2O2诱导衰老作用最强。

• 单位
  解放军总医院