小鼠Retn基因siRNAs的设计及其稳定表达载体的构建

作者：李雅慧; 黎怀星; 吴丹; 施柯; 蔡东联; 孙树汉

来源：第二军医大学学报, 2004, (02): 136-139.

DOI：10.16781/j.0258-879x.2004.02.007

• 小分子干涉RNA
• Retn基因
• 基因表达

目的 :设计小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs,并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些 si RNAs的表达质粒 ,以便为在体外研究 Retn基因的功能打下基础。 方法 :(1 )设计并合成小鼠 Retn基因特异性的一组寡核苷酸片段 ,并克隆到 p Silencer EM 1 .0 - N eo载体 ;(2 )用电穿孔转染和 G4 1 8筛选等方法建立能稳定表达相应 si RNAs的一组 3T3- L1细胞克隆 ;(3)诱导细胞分化为脂肪细胞 ,并用 RT- PCR分析这些脂肪细胞内 Retn基因的 m RNA水平。 结果 :设计并构建了 4个小鼠Retn基因特异性的 si RNAs表达质粒 ,并证明其中的 2种质粒能在脂肪细胞内稳定表达相应的 si RNAs,显著地抑制了这些脂肪细胞内 Retn基因的 m RNA水平。 结论 :本研究设计并构建出的小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs表达载体 ,所表达的 si R-NAs具有较强的 RNA干涉功能 ,为 Retn基因的功能研究奠定了实验基础

• 单位
  长海医院; 中国人民解放军第二军医大学