田鼠巴贝斯虫醛酮还原酶BmAKR2的基因克隆和鉴定

作者：黄强; 曹杰; 周勇志; 龚海燕; 张厚双; 周金林

来源：中国兽医科学, 2017, 47(10): 1227-1233.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2017.10.004

• 田鼠巴贝斯虫
• 醛酮还原酶
• 克隆
• 鉴定

为了解田鼠巴贝斯虫(Babesia microti)在富氧环境下的抗氧化能力,克隆了田鼠巴贝斯虫醛酮还原酶(aldo-keto reductases,AKRs)基因并进行了鉴定。全长的田鼠巴贝斯虫醛酮还原酶(BmAKR2)包含2 490 bp的阅读框,编码829个氨基酸。经BLAST分析,发现该蛋白质在第172542位氨基酸残基区域存在典型的AKR结构域。将该酶的结构域克隆到表达质粒pGEX-4T-1中,然后转化到BL21(DE3)中进行原核表达,获得了GST融合重组蛋白GST-BmAKR2-HX。使用该重组蛋白免疫小鼠制备抗体,Western-blot鉴定结果显示,天然BmAKR2蛋白的分子质量为96 ku,与预测的大小一致。间接免疫荧光试验结果显示BmAKR2定位于田鼠巴贝斯虫裂殖子的细胞核。通过实时荧光定量PCR分析,表明BmAKR2在感染小鼠的第214天内均表达,其中第5天为表达峰期。

• 单位
  农业部; 中国农业科学院上海兽医研究所