稳定干扰NORⅠ基因对HeLa细胞的影响

作者：谭怡忻; 李文娟; 易梅; 王卫; 郑盼; 张海静; 向波; 李桂源

来源：中南大学学报(医学版), 2014, 39(8): 757-763.

DOI：10.11817/j.issn.1672-7347.2014.08.001

• NOR1
• 宫颈癌
• RNAi
• 凋亡

目的:研究稳定干扰NOR1基因对官颈癌HeLa细胞系的影响.方法:采用pSUPER.neo+GFP载体构建靶向NOR1基因的shRNA干扰载体pSUPER-shNOR1-1,pSUPER-shNOR1-2以及无关序列对照载体pSUPER-scramble,通过脂质体转染HeLa细胞,经G418筛选获得稳定干扰细胞系.采用RT-PCR和Western印迹检测NOR1 mRNA和蛋白表达水平.采用MTT法测定细胞生长曲线.采用H2O2处理HeLa细胞,采用Hoechst33258染色和TUNEL法测定细胞凋亡.Western印迹检测干扰NOR1对HeLa细胞凋亡相关分子Bcl-2,caspase和聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)表达的影响.结果:稳定感染的shRNA干扰载体pSUPER-shNOR1-1和pSUPER-shNOR1-2抑制了HeLa细胞内源性NOR1的基因表达,成功构建了稳定干扰NORI基因的HeLa细胞系.MTT生长曲线测定表明:与pSUPER-scramble质粒转染细胞相比,稳定转染pSUPER-shNOR1-1和pSUPER-shNOR1-2质粒促进了HeLa细胞的活力和增殖,并抑制了H2O2诱导的HeLa细胞凋亡.Western印迹检测发现稳定干扰NOR1抑制了H2O2诱导的HeLa细胞caspase 9和PARP的活化,上调了Bcl-2蛋白的表达.结论:稳定干扰NOR1基因促进了HeLa细胞的活力与生长,并抑制了H2O2诱导的细胞凋亡,其机制与干扰NOR1表达引起抗凋亡分子Bcl-2表达增加和抑制caspase 9活化有关.

• 单位
  中南大学; 中心实验室; 中南大学湘雅二医院; 中南大学湘雅医院; 湖南省肿瘤医院