猪δ冠状病毒M蛋白的截短表达及间接ELISA方法的建立

作者：宋代丽; 杨富升; 陈钰乔; 孙凡媛; 陈汭; 曹三杰; 黄小波^*

来源：农业生物技术学报, 2022, 30(02): 402-412.

• 猪δ冠状病毒(PDCoV)
• M蛋白
• 截短表达
• 间接ELISA
• 应用

猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)是一种新出现的猪(Sus scrofa)肠道致病性冠状病毒,可导致哺乳仔猪严重脱水、呕吐及水样腹泻,在全球范围内广泛分布。为建立一种快速检测PDCoV抗体的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学方法分析M蛋白的基因序列特性,设计并扩增PDCoV的M基因序列76～651 bp区域,与表达载体pET-32a构建重组质粒,转化大肠杆菌(Escherichia coil)Transetta (DE3)进行诱导表达,获得截短表达的M蛋白(约35 kD);Western blot实验证明其与猪PDCoV阳性血清有良好的反应原性。基于纯化的重组M截短蛋白构建间接ELISA方法,确定阴阳性判定临界值为0.271。建立的ELISA方法与猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)、猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV-2)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)、猪口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(Swine transmissible gastroenteritis virus, TGEV)等阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数均小于10%;与基于PDCoV S1-CTD蛋白的间接ELISA方法的总符合率高达96%,表明该方法具备良好的特异性、敏感性、重复性及较高的符合率。用建立的ELISA方法检测2012～2018年四川部分地区收集的507份猪血清,结果显示总阳性率为49.11%,初步证明该病已在四川感染严重。本研究基于M截短蛋白构建的间接ELISA方法,为PDCoV疫病诊断和血清流行病学调查提供技术支持,对于PDCoV防控具有一定的意义。

• 单位
  四川农业大学