棒状链霉菌蛋白质样品提取方法及双向凝胶电泳条件的优化

作者：王美龙; 王永红; 银鹏; 张嗣良; 冯涛; 夏月兰

来源：中国抗生素杂志, 2009, (10): 609-616.

DOI：10.13461/j.cnki.cja.004457

• 棒状链霉菌
• 双向电泳
• 蛋白质组学 Streptomyces clavuligerus
• Two-dimensional electrophoresis
• Proteomics

针对基于工业用复合培养基的棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)发酵液杂质含量高特性,对蛋白质样品制备、第一向等电聚焦和第二向SDS-PAGE电泳相关的主要实验条件进行了研究和优化。所得最适条件为:采用液氮研磨方法破碎细胞,用10%的TCA/丙酮沉淀法除盐,用含有7 mol/L尿素,2 mol/L硫脲,2%CHAPS,20 mmol/L DTT,0.5%IPG缓冲液(pH3~10)的溶胀液重悬蛋白,应用pH梯度为4~7,长度为24 cm的固定化胶条进行第一向等电聚焦,浓度为12.5%的聚丙烯酰胺凝胶进行第二向SDS-PAGE,考马斯亮蓝R-250染色,上样量为600μ...

• 单位
  生物反应器工程国家重点实验室; 华东理工大学