M2型巨噬细胞抑制放射后骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞转化的实验研究

作者：赵路; 张哲儒; 贾骏麒; 宗春琳; 景莉; 郭凯; 田磊^*

来源：中华口腔医学研究杂志(电子版), 2021, 15(04): 198-206.

• 骨髓细胞
• 间质干细胞
• 巨噬细胞
• 肌动蛋白类
• 胶原Ⅲ型
• 活性氧

目的研究M2型巨噬细胞对放射后的骨髓间充质干细胞(BMSC)向肌成纤维细胞转化的抑制作用。方法分别培养SD大鼠来源的BMSC和由巨噬细胞极化而来的M2型巨噬细胞,通过免疫荧光鉴定其表面标志物。首先建立BMSC体外细胞辐照模型,然后依据本模型将放射后的BMSC整体单纯随机抽样分为3组,每组3个孔进行研究:实验组1(3μm组),放射后的BMSC+M2型巨噬细胞Transwell小室(3μm)共培养;实验组2(8μm组),放射后的BMSC+M2型巨噬细胞Transwell小室(8μm)共培养;对照组(NC组),BMSC单纯放射组。利用Western blot检测各组BMSC内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的含量,免疫荧光技术检测Ⅲ型胶原(ColⅢ)、活性氧(ROS)的表达水平。实验数据应用SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果 SD大鼠BMSC培养基中加入巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)30 ng/mL培养6～9 d后可获得成熟的巨噬细胞;应用20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)24 h后可诱导成熟的巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞;放射后的BMSC与M2型巨噬细胞用Transwell小室共培养48 h后,BMSC中α-SMA表达量明显降低,且8μm组的Transwell小室的效果(0.225±0.018)要优于3μm组的效果(0.564±0.026),差异具有统计学意义(t=18.71,P<0.001)。通过8μm Transwell小室将放射后的BMSC与M2型巨噬细胞共培养后,8μm组BMSC中ColⅢ阳性百分比[(8.2±0.5)%]明显低于NC组[(60.7±1.5)%],差异有统计学意义(t=56.47,P<0.001),且8μm组中ROS阳性百分比[(9.3±1.7)%]较NC组[(25.9±1.6)%]亦显著降低,差异也有统计学意义(t=12.4,P=0.0002)。结论 M2型巨噬细胞可以减少放射后的BMSC中α-SMA、ColⅢ的表达并减少ROS的生成,抑制放射后的BMSC向肌成纤维细胞的转化,可能对放射性颌骨骨坏死具有一定的治疗作用。

• 单位
  军事口腔医学国家重点实验室; 第四军医大学; 解放军总医院