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摘要
目的原核表达肺炎链球菌SPD1672蛋白膜外EL4功能环,制备并鉴定其多克隆抗血清。方法生物信息学分析SPD1672蛋白结构功能区,用p Cold TF质粒构建含EL4功能环的原核表达载体,IPTG诱导蛋白质表达后行镍柱纯化。经HRV 3C蛋白酶酶切、鉴定后,免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗血清,间接ELISA鉴定效价,western blot鉴定抗血清与肺炎链球菌D39菌株天然蛋白质的亲合力。结果 EL4环可能为SPD1672蛋白酶活性中心。成功构建p Cold TF-SPD1672EL4原核表达载体,诱导表达后获得纯度大于95%的重组融合目的蛋白质。该蛋白质免疫新西兰大白兔后获得效价达到5.12×106的多克隆抗血清,此抗血清与重组的SPD1672EL4蛋白及肺炎链球菌中天然SPD1672蛋白有较好的亲合力。结论成功获得高纯度的肺炎链球菌SPD1672EL4蛋白及其特异的多克隆抗血清,为进一步对SPD1672蛋白的结构与功能研究奠定了基础。
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单位遵义医学院附属医院
