双重荧光数字PCR方法定量检测贝类中诺如病毒

作者：白雪^*; 张淑红; 申志新

来源：食品安全质量检测学报, 2019, 10(24): 8444-8449.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2019.24.042

• 数字PCR
• 诺如病毒
• 定量检测

目的建立双重荧光微滴式数字反转录聚合酶链式反应(microdropdigitalreversetranscription polymerase chain reaction, RT-ddPCR)法定量检测贝类样品中诺如病毒。方法确定RT-ddPCR方法的最佳退火温度和探针浓度,建立贝类中诺如病毒双重荧光数字PCR检测方法,并定量检测秦皇岛2015～2017年7月采集的贝类样品中的诺如病毒。结果贝类中诺如病毒RT-ddPCR检测方法线性范围为5×104～5×100copy/μL,检出限为1.0 copy/20μL的反应体系。用数字PCR方法检出秦皇岛贝类样品中诺如病毒总阳性率为67%, GⅠ型病毒平均浓度为8.70×102 copy/g消化腺, GⅡ型病毒平均浓度为1.04×103 copy/g消化腺。结论与荧光定量反转录聚合酶链式反应(fluorescence quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, RT-qPCR)方法相比,数字PCR方法在检测贝类诺如病毒时有明显优势,能提高病毒检出率,不依赖标准品进行绝对定量。

• 单位
  河北省疾病预防控制中心