稳定表达重组长效促红细胞生成素的CHO-K1细胞株的筛选

作者：吴建勇; 易小萍; 张元兴; 孙祥明

来源：中国生物制品学杂志, 2011, (08): 898-902.

DOI：10.13200/j.cjb.2011.08.31.wujy.005

• 促红细胞生成素
• 密码子
• CHO细胞 Erythropoietin(EPO)
• Codon
• CHO cells

目的将密码子优化的一系列长效促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)基因定点整合至CHO-K1细胞株中,获得高效稳定表达的细胞株。方法对EPO基因定点突变得到Darbepoetin-1序列(专利公开序列)及其同义密码子序列Darbe-poetin-2、Darbepoetin-3,并构建相应重组表达质粒pcDNA5/FRT/dbp(s),采用定点整合技术,转染CHO-K1细胞株,经ELISA和荧光定量PCR法鉴定转染细胞株,比较同一整合位点同义密码子Darbepoetin alfa蛋白表达水平的差异。蛋白样品经蓝胶亲和层析、凝胶过滤和离子交换层析后,进行SDS-PAGE、Weste...

• 单位
  华东理工大学; 生物反应器工程国家重点实验室