病毒性心肌炎血清外泌体来源的miR-320通过靶向Pik3r1抑制AKT/mTOR通路促进小鼠心肌细胞凋亡

作者：张欣; 李雪琴; 朱良宇; 殷国泉; 张苑; 吕坤^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2023, 39(06): 516-525.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009590

• 病毒性心肌炎
• 外泌体
• 磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1(Pik3r1)
• miR-320
• 心肌细胞
• 凋亡

目的 探讨病毒性心肌炎血清外泌体miR-320对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法 使用柯萨奇病毒B3(CVB3)腹腔注射，建立病毒性心肌炎小鼠模型；采用血清外泌体抽提试剂盒提取血清外泌体，与心肌细胞共培养，激光共聚焦显微镜观察心肌细胞摄取外泌体情况；使用miR-320抑制剂或模拟物转染心肌细胞，实时荧光定量PCR检测miR-320表达水平；采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(BAX)表达水平；生物信息学预测miR-320靶基因并进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析；荧光素酶报告基因检测miR-320与其靶基因磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1(Pik3r1)的作用关系；Western blot法检测miR-320对蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)通路蛋白的影响。结果 病毒性心肌炎血清外泌体促进心肌细胞凋亡并上调BAX水平，同时降低Bcl2水平；病毒性心肌炎小鼠心肌组织中miR-320显著上调，且miR-320成熟体和miR-320前体pri-miR-320表达在心肌细胞均明显上调；病毒性心肌炎血清外泌体处理的心肌细胞中miR-320水平显著上调，而转染miR-320抑制剂逆转了外泌体引起的miR-320上调及凋亡率升高；Pik3r1是miR-320的靶基因，其过表达逆转miR-320上调导致的心肌细胞凋亡；miR-320过表达抑制AKT/mTOR通路激活。结论 病毒性心肌炎血清外泌体miR-320通过靶向Pik3r1抑制AKT/mTOR通路促进小鼠心肌细胞凋亡。

• 单位
  中心实验室; 皖南医学院; 皖南医学院弋矶山医院